Negative Färbung von gereinigten Exosomen: Ein Verfahren zur Visualisierung der Exosomenmorphologie mittels Transmissionselektronenmikroskopie

Um eine negative Färbung von Exosomen - nanosierten, kugelförmigen Vesikeln - durchzuführen, beginnen Sie mit der Verwendung eines geeigneten Elektronenmikroskopiegitters. Bereiten Sie das Gitter mit einem Glühentlader vor. Dieser Prozess macht die Gitteroberfläche hydrophil für eine bessere Haftung der Proben.

Nehmen Sie gleichzeitig eine Suspension der gereinigten Exosomen in ein Röhrchen. Ergänzen Sie das Röhrchen mit Paraformaldehyd - einem Probenfixiermittel - und inkubieren Sie. Paraformaldehyd dringt in die Exosomen ein und vernetzt die Proteine und Nukleinsäuren. Dieser Schritt ist wichtig, um die Morphologie von Exosomen zu erhalten.

Laden Sie nun die Exosomensuspension auf das vorbereitete Gitter und inkubieren Sie, damit die Adsorption stattfinden kann. Geben Sie als Nächstes ein paar Tropfen Uranylacetat, einen Schwermetallfleck, über das Gitter. Uranyl-Ionen binden an die Membranproteine und Lipide und bilden eine Ablagerung um die Exosomengrenze.

Waschen Sie zuletzt das Gitter mit Wasser, um den überschüssigen Fleck zu entfernen. Lassen Sie das Gitter trocknen und bilden Sie es mit der Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) ab.

Wenn ein Elektronenstrahl auf die Exos