Extraktion von Skelettmuskeln der Hintergliedmaßen: Ein Verfahren zur Entfernung der Skelettmuskulatur der Hintergliedmaßen aus dem Mausmodell
JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:40 Min. • April 30th, 2023
Bereiten Sie zunächst eine euthanasierte Maus in Rückenlage vor. Klemme einen seiner Füße fest, um den Wurfarm vertikal zu verlängern. Halten Sie die Haut der unteren Extremität sanft fest.
Als nächstes entfernen Sie operativ die Haut und die Faszien, die Schicht aus losem Bindegewebe direkt unter der Haut, und legen die darunter liegenden Muskelbäuche der unteren Extremität frei.
Identifizieren Sie den Musculus gastrocnemius - einen großen, oberflächlichen zweiköpfigen Muskel - an der hinteren unteren Extremität. Sie entspringt den lateralen und medialen Kondylen des hinteren Oberschenkelknochens und setzt über die Fersenbeinsehne am Fersenbein an.
Halten Sie das distale Ende des Muskels fest und ziehen Sie den Muskelbauch in Richtung seines Ursprungs. Exzidieren Sie die Fersenessehne des Gastrocnemius, gefolgt von dem Muskel an der Stelle, die dem Oberschenkelknochen am nächsten liegt.
Lokalisieren Sie nun den Musculus tibialis anterior. Der Muskel entspringt an der anterolateralen Oberfläche der Tibia und ist über die distale Sehne mit dem medialen Keilbein verbunden.
Löse den Bauch des Tibialis-Muskels vom darunter liegenden Bindegewebe. Durchtrennen Sie die distale Sehne und den Muskel an der Stelle, die der Tibia am nächsten liegt.
Übertragen Sie abschließend die herausgeschnittenen Muskeln in Kryoröhrchen. Lagern Sie die Röhrchen bis zur weiteren nachgelagerten Analyse bei niedrigen Temperaturen.
Um eine Fellkontamination zu vermeiden, sprühen Sie 70% Ethanol über den gesamten Körper. Legen Sie dann das Tier in Rückenlage auf ein Sezierbett und befestigen Sie ein Hinterglied an einer erhöhten Bürettenklemme, um das Glied vertikal zu strecken. Fassen Sie mit einer Dumont-Zange die oberflächliche Haut der hinteren Extremität und entfernen Sie mit einer gebogenen feinen Schere sanft die Haut und die Faszien, wobei die darunter liegenden Muskelbäuche der unteren Extremität freigelegt werden.
Identifizieren Sie den Musculus gastrocnemius an der hinteren unteren Extremität anhand seines Ursprungs an den lateralen und medialen Kondylen am hinteren Femur und seines Ansatzes am Fersenbein über die Fersenbeinsehne. Fassen Sie mit der Pinzette das distale Ende des Gastrocnemius und ziehen Sie den Muskelbauch zu seinem Ursprung. Schneiden Sie dann mit einer Schere den Muskel am Ursprung so nah wie möglich am Oberschenkelknochen ab und übertragen Sie den Muskel in eine vorgewogene Schale.
Wiegen Sie die Schale sofort ab und geben Sie den Muskel in ein vorbeschriftetes Kryoröhrchen. Als nächstes wird der Musculus tibialis anterior von seinem Ursprung an der anterolateralen Oberfläche der Tibia und seinem Ansatz an der medialen Keilschrift über seine distale Sehne identifiziert. Fassen Sie dann den Fuß mit Zeigefinger und Daumen an den Fingern und führen Sie die Spitze der Dumont-Pinzette unmittelbar unter die oberflächliche distale Sehne des Schienbeins ein.
Bewegen Sie die Pinzette so, dass mit der stumpfen Seite der Bauch des Tibialis-Muskels vom darunter liegenden Bindegewebe gelöst werden kann und schneiden Sie mit der fein gebogenen Schere die distale Sehne durch. Schneiden Sie dann den Muskel am Ursprung so nah wie möglich an der Tibia ab.
Übersicht
In diesem Artikel wird ein chirurgisches Verfahren zur Isolierung der Muskeln Musculus gastrocnemius und Musculus tibialis anterior von einer euthanasierten Maus beschrieben. Die Methode umfasst detaillierte Schritte zur Identifizierung, Entfernung und Konservierung der Muskeln für weitere Analysen.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Neurowissenschaften
- Muskelphysiologie
- Tierchirurgie
Hintergrund
- Die Muskeln Musculus gastrocnemius und Musculus tibialis anterior sind entscheidend für die Untersuchung der Muskelphysiologie und -pathologie.
- Das Verständnis der Muskelanatomie ist für verschiedene experimentelle Anwendungen unerlässlich.
- Angemessene Dissektionsmethoden sind entscheidend, um die Integrität des Muskelgewebes zu bewahren.
- Muskelproben werden häufig in metabolischen und physiologischen Studien verwendet.
Zweck der Studie
- Die chirurgische Technik zur Muskelisolation bei Mäusen demonstrieren.
- Einen Protokollrahmen für die anschließende Analyse von Muskeleigenschaften bereitstellen.
- Das Verständnis der Muskelanatomie und ihrer Bedeutung in der Forschung vertiefen.
Verwendete Methoden
- Vorbereitung der euthanasierten Maus in Rückenlage.
- Chirurgische Entfernung von Haut und Faszie, um die Muskulatur freizulegen.
- Identifizierung und Entfernung der Musculus gastrocnemius und des Musculus tibialis anterior.
- Lagerung der entnommenen Muskeln in Kryoröhrchen zur Analyse.
Hauptergebnisse
- Erfolgreiche Isolierung der Musculus gastrocnemius und des Musculus tibialis anterior.
- Erhaltung der Muskelproben für nachgeschaltete Analysen.
- Detaillierte Verfahrensschritte gewährleisten die Reproduzierbarkeit der Muskelpräparation.
- Deutliche Identifizierung der Muskelanatomie unterstützt die Versuchsplanung.
Schlussfolgerungen
- Die beschriebene Methode bietet einen zuverlässigen Ansatz zur Muskelisolierung.
- Die korrekte Technik ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der Probenintegrität.
- Dieses Protokoll kann an verschiedene experimentelle Anforderungen in der Muskelforschung angepasst werden.
Häufig gestellte Fragen
Aussagekräftige Relevanz für die Industrie
Die präzise Isolierung von Muskelgewebe ermöglicht zuverlässige biochemische und histologische Analysen in präklinischen Studien. Dieses Verfahren unterstützt die Zielvalidierung, indem es Gewebeproben von hoher Integrität für die mechanistische Entschärfung muskelbezogener Signalwege bereitstellt. Reproduzierbare Exzisionstechniken verbessern die Bereitschaft für Assays und die Datenkonsistenz über verschiedene Entdeckungsworkflows hinweg.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Wissenschaftlicher Wert: Ermöglicht die Überprüfung therapeutischer Hypothesen durch funktionelle Analyse von entferntem Muskelgewebe.
- Operationaler Wert: Bietet standardisierte Gewebepräparation für konsistente experimentelle Ergebnisse.
- Predictiver Wert: Unterstützt die biologische Risikominimierung, indem die Muskelintegrität für nachgeschaltete Target-Engagement-Studien erhalten bleibt.
Screening und Assay-Entwicklung
- Assay-Bereitschaft: Entnommene Muskeln dienen als validierte biologische Systeme für die Wirkstoff-Screening- und Signalwegmodulationsstudien.
- Quantitative Ausgabe: Ermöglicht eine konsistente Messung von Muskelmasse, Proteingehalt und enzymatischer Aktivität.
- Reproduzierbarkeit: Ein standardisierter Dissektionsprotokoll verringert die Variabilität in präklinischen Assayergebnissen.
Translationale und präklinische Forschung
- Krankheitsrelevanz: Unterstützt Studien in Modellen von Muskelabbau wie Krebskachexie und neuromuskulären Erkrankungen.
- Translationale Kontinuität: Stellt Gewebe für die Biomarker-Analyse bereit, die Entdeckung und präklinische Validierung verbindet.
- Risikoadjustierte Weiterentwicklung: Zuverlässige Gewebeproben erhöhen die Sicherheit bei Go/No-Go-Entscheidungen für muskelzielgerichtete Therapeutika.
Pipeline- und Workflow-Integration
Diese Methode fügt sich in die Entdeckungskette von der Zielidentifizierung bis zur präklinischen Validierung ein, indem sie eine zuverlässige Gewinnung von Gewebeproben für funktionelle Assays ermöglicht.
- Entdeckungsbiologie: Unterstützt die Hypothesenprüfung und Klärung von Signalwegen durch die Analyse isolierten Muskelgewebes.
- Screening: Bereitet Gewebe für die Einsatzbereitschaft in Verbindung mit Wirkstoffscreenings und Target-Engagement-Studien vor.
- Analytik: Ermöglicht quantitative Messungen wie Muskelgewicht und Proteinausbeute für vergleichende Analysen.
- Translationale Forschung: Verbindet die frühe Entdeckung mit der präklinischen Validierung durch konsistente Gewebeprobenentnahme zur Biomarker-Abstimmung.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Schafft eine wiederverwendbare Präparationsfähigkeit für mehrere Projekte zur Muskelphysiologie und -pathologie.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Steigert die Vorhersagesicherheit, da die Gewebestruktur für nachfolgende Analysen erhalten bleibt.
- Operativer Wert: Gewährleistet Standardisierung und Reproduzierbarkeit bei der Muskelgewebepräparation.
- Strategischer Wert: Verbessert die Kapitalnutzungseffizienz durch Verringerung der Variabilität präklinischer Ergebnisse.
- Portfolio-Wirkung: Unterstützt die risikoadjustierte Priorisierung anhand zuverlässiger gewebebasierter Daten.
Durchführungsüberlegungen
- Erfordert Fachkenntnisse in der Anatomie von Nagetieren und chirurgischen Dissektionstechniken.
- Benötigt sterile Instrumente und eine Infrastruktur für kryogene Lagerung.
- Erfordert eine standardisierte Vorgehensweise über verschiedene Teams hinweg, um eine einheitliche Gewebehandlung an verschiedenen Standorten sicherzustellen.
- Erfordert Anpassungen je nach Muskelgruppe und Art.
- Ist durch den Gewebezerfall begrenzt, wenn die Probe nicht umgehend bei tiefen Temperaturen gelagert wird.
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Zuletzt aktualisiert: 22 August 2026