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Krebsforschung
0 Aufrufe • 5:01 Min. • April 30th, 2023
Die intestinale Lamina propria, die sich unterhalb des Darmepithels befindet, besteht aus lockerem Bindegewebe zusammen mit einem dichten Netzwerk von Kollagenfasern, das eine Vielzahl von Zellen wie Fibroblasten, mononukleäre Zellen, einschließlich Lymphozyten und Monozyten, enthält. Diese Zellen spielen eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der Homöostase.
Um mononukleäre Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme von Dickdarmfragmenten der Maus. Behandeln Sie die Fragmente mit einem Verdauungspuffer, der Kollagenase-Enzyme enthält. Kollagenase-Enzyme verdauen die Kollagenfasern im Gewebe und geben die Zellen in Suspension frei.
Sammeln Sie den Überstand und filtrieren Sie ihn durch Zellsiebe, um unverdautes Gewebe und Ablagerungen zu entfernen und eine einzellige Suspension zu erhalten. Fügen Sie dem Filtrat einen gekühlten Puffer hinzu, um die Kollagenase-Enzyme zu inaktivieren.
Zentrifugieren, um die Zellen zu trennen. Der Überstand, der die Enzyme enthält, wird verworfen und das Zellpellet in einem Trennmedium auf Siliziumdioxidbasis niedriger Dichte resuspendiert. Als nächstes schichten Sie die Suspension über ein Trennmedium auf Siliziumdioxidbasis hohe
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