JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:14 Min. • April 30th, 2023
Um Dünnschnitte einer Mausniere herzustellen, besorgen Sie sich zunächst eine frisch entnommene Mausniere. Übertragen Sie die Niere auf ein Filterpapier und trocknen Sie es, um eine optimale Haftung auf dem Vibratom-Probenhalter zu gewährleisten.
Montieren Sie als Nächstes die Niere mit der Harnleiterseite nach unten, indem Sie eine dünne Schicht Cyanacrylatkleber auf die Basis des Vibratom-Probenhalters auftragen und die Niere in einer aufrechten Position halten. Schieben Sie den Probenhalter auf eine Pufferschale.
Füllen Sie das Tablett mit einem geeigneten Puffer, um die obere Oberfläche der Niere vollständig einzutauchen. Ein Eisbad umgibt die Schale, um Gewebeschäden durch Hitzestau während des Schneidens zu verhindern. Stellen Sie das Vibratomus-Blatt auf einen geeigneten Winkel, eine geeignete Geschwindigkeit und eine geeignete Amplitude ein. Passen Sie den Dickenparameter an, um Gewebeschnitte mit der gewünschten Dicke zu erhalten.
Während des Betriebs vibriert die Klinge seitlich und bewegt sich vor, wobei sie durch die Gewebeprobe dringt. Die vibrierende Klinge ermöglicht das Schneiden mit weniger Druck und minimiert die Gewebeverformung, wodurch gleichmäßige Nierengewebeschnitte von Interesse erzeugt werden, während die Gewebemorphologie erhalten bleibt.
Stellen Sie in der Zwischenzeit eine Multi-Well-Platte zusammen, die eine geeignete gekühlte Pufferlösung enthält, um die physiologischen Bedingungen des Gewebes nachzuahmen. Übertragen Sie nun die geschnittenen Gewebeschnitte in den Puffer. Lagern Sie die Gewebeschnitte abschließend bis zur weiteren Analyse bei niedriger Temperatur.
Verwenden Sie eine stumpfe Pinzette, um die vorbereitete Niere vorsichtig aus der eiskalten KRB-Lösung zu greifen und zu entfernen. Legen Sie die Niere sofort für ca. 2 bis 4 Sekunden auf saugfähiges Papier, um überschüssige äußere Feuchtigkeit zu entfernen. Rollen Sie die Niere vorsichtig über das saugfähige Papier, um sicherzustellen, dass alle Seiten des Parenchyms getrocknet sind, damit die Niere optimal am Vibratomstadium haftet.
Tragen Sie sofort eine dünne Schicht Cyanacrylatkleber auf die Basis der Vibratom-Probenplatte auf und platzieren Sie die Niere mit einer stumpfen Pinzette mit der Harnleiterseite nach unten auf der mit Klebstoff bedeckten Stelle. Üben Sie mit der flachen Kante der Pinzette etwa 10 bis 20 Sekunden lang sanften Druck auf die Oberseite der Niere aus, um den Kleber zu trocknen.
Befestigen Sie die Probenplatte fest am Boden der Pufferschale und stellen Sie den Gehalt an KRB-Lösung so ein, dass die Oberseite der Niere vollständig eingetaucht ist. Wählen Sie für die automatische Vibrationstrennung die Start- und Endposition des Vibrationsmesser-Schneidzyklus in einem Abstand von 0,5 bis 1 Zentimeter zur Niere aus, um sicherzustellen, dass die gesamte Nierenebene durchtrennt wird.
Starten Sie den automatischen Schneidvorgang und stellen Sie sicher, dass die Klinge die Niere berührt. Entnehmen Sie mit einer Pinzette Abschnitte, die aus der Niere freigesetzt werden, und übertragen Sie sie sofort in einzelne Vertiefungen.