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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:32 Min. • April 30th, 2023
Für die Generierung eines vom Patienten stammenden Urothelzellkarzinoms oder UCC-Mausmodells wird eine immungeschwächte Maus mit humanen UCC-Zellen geimpft, um das Fortschreiten und die Metastasierung von Krebs zu untersuchen.
Um mit der Xenotransplantation zu beginnen, nehmen Sie eine immungeschwächte, anästhesierte weibliche Maus. Rasieren Sie den unteren Rücken der Maus, um die Beckenregion freizulegen. Platzieren Sie nun die Maus in Rückenlage, wobei ihre freiliegende Haut mit einem dispersiven Pad in Kontakt kommt, das als Erdungselektrode dient, um den Schaltkreis während der elektrischen Stimulation zu schließen.
Nehmen Sie als nächstes einen Angiokatheter, einen dünnen hohlen Schlauch, der an einem Führungsdraht befestigt ist. Schmieren Sie die Oberfläche des Katheters und führen Sie ihn in die Harnröhre der Maus ein, um Zugang zu ihrer Blase zu erhalten. Legen Sie eine aktive Elektrode auf den Führungsdraht, um die Blasenwand zu stimulieren. Dieses Verfahren hilft beim Aufreißen der Mukopolysaccharidschicht, einer Schutzbarriere der Blasenschleimhaut, und hilft bei der anschließenden Transplantation von Tumorzellen.
Entfernen Sie nun vorsichtig die Angiokatheter-Führungsdraht-Baugruppe aus der Harnröhre. Nehmen Sie einen zweiten Angiokatheter, der an einer Spritze befestigt ist, die die UCC-Zellsuspension enthält, und führen Sie ihn in die Harnröhre der Maus ein. Injizieren Sie die UCC-Zellen in die Blase der Maus. Krebszellen interagieren mit der Blasenschleimhaut und bilden einen Tumor, der sich schließlich auf andere Gewebe und Organe ausbreiten kann.
Um das Tier auf die UCC-Zellinjektion vorzubereiten, rasieren Sie mit Haarentfernungscreme den unteren Rücken einer 6 bis 8 Wochen alten weiblichen NOD/SCID-Maus. Um UCC-Zellen in die Blase zu verabreichen, wird zunächst ein monopolares Elektrokautergerät mit einer Leistung von 4 Watt eingerichtet. Nachdem Sie die Maus betäubt haben, legen Sie sie in Rückenlage, mit der Schnauze in einem Isofluran-Nasenkegel und dem nackten Rücken, fest auf einer dispersiven Elektrode geerdet.
Schmieren Sie einen 24-Gauge-Angiokatheter mit Gleitgel und führen Sie den Angiokatheter dann sanft, aber fest durch die Harnröhre der Maus ein. Wenn sich der Katheter beim Eintritt verbiegt, führen Sie den Führungsdraht auf halber Höhe in den Katheter ein, um die Stabilität zu gewährleisten. Führen Sie dann den 0,64 Millimeter langen geraden Führungsdraht mit festem Kern 1 Millimeter über das Ende des Angiokatheters hinaus vollständig ein.
Halten Sie den monopolaren Stift 1 Sekunde lang an den Führungsdraht, um eine elektrische Reizung der Blasenschleimhaut zu ermöglichen. Setzen Sie einen frischen sterilen Angiokatheter auf eine 1-Milliliter-Luer-Lok-Spritze und entnehmen Sie bis zu 200 Mikroliter UCC-Zellen. Entfernen Sie den Führungsdraht und den Angiokatheter aus der Harnröhre und führen Sie dann den Angiokatheter mit einer Spritze mit den daran befestigten Zellen ein.
Injizieren Sie 50 Mikroliter der Zellen in die Blase der Maus und warten Sie einige Sekunden, bevor Sie den Angiokatheter entfernen, damit die Zellen an der Blasenwand haften können. Entfernen Sie abschließend die Maus aus dem Isofluran-Nasenkegel und dem Erdungspad und beobachten Sie sie 1 Stunde lang nach dem Verfahren auf Anzeichen von Beschwerden.