Isolierung von Detrusor-Zellen der glatten Muskulatur: ein enzymatisches Verdauungsverfahren zur Gewinnung von DSM-Zellen aus menschlichen Harnblasenproben

Detrusor-Zellen der glatten Muskulatur (DSM), die in der Harnblasenwand vorhanden sind, bilden die primäre Funktionseinheit der Blase. Diese Zellen entspannen sich, um die Urinspeicherung in der Blase zu erleichtern, und ziehen sich zusammen, um den Urin freizusetzen.

Um DSM-Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme einer entnommenen menschlichen Harnblasenprobe. Waschen Sie die Probe, um Blutspuren und Ablagerungen zu entfernen. Befestigen Sie anschließend das Gewebe mit der Schleimhautoberfläche nach oben. Entfernen Sie das Fett, die Blutgefäße und die Schleimhautschicht, um die darunter liegende Detrusormuskelschicht freizulegen. Schneiden Sie dann das schleimhautfreie Gewebe in kleine Fragmente.

Behandeln Sie die Gewebefragmente mit einem Verdauungscocktail mit Papain und inkubieren Sie. Papain, ein proteolytisches Enzym, fördert die Verdauung von Proteinen in der extrazellulären Matrix, die die Zellen zusammenhalten, und leitet die Lockerung der Zellen in der Matrix ein. Entferne nun den Papain-haltigen Überstand.

Geben Sie Kollagenase-Enzymsuspension zu den Gewebefragmenten und inkubieren Sie bei physiologischer Temperatur. Kollagenase baut die extrazelluläre Matrix