JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:11 Min. • April 30th, 2023
Exosomen - nanogroße, membrangebundene Vesikel, die funktionelle Biomoleküle tragen - werden von den meisten Zelltypen aktiv sezerniert und können aus in vitro Zellkulturüberständen isoliert werden. Um Exosomen zu isolieren, ernten Sie zunächst den Überstand oder das konditionierte Medium aus einer Zellkultur von Interesse. Das konditionierte Medium würde Exosomen, Proteine, Zelltrümmer und Vesikel enthalten.
Zentrifugieren Sie das Medium, um die Zelltrümmer zu pelletieren. Sammeln Sie den exosomenhaltigen Überstand und filtrieren Sie ihn durch Zellsiebe, um die größeren Vesikel zu entfernen. Übertragen Sie ein bestimmtes Volumen des gefilterten Mediums in ein frisches Rohr. Mischen Sie anschließend geeignete Konzentrationen von Saccharose und Deuteriumoxid, um ein Saccharosekissen herzustellen - einen diskontinuierlichen Gradienten aus Saccharose.
Geben Sie ein bestimmtes Volumen der Saccharose-Kissenlösung in das medienhaltige Röhrchen; die Lösung bildet am Boden eine separate Schicht. Zentrifugieren Sie nun das Röhrchen mit hoher Geschwindigkeit. Das Saccharosekissen erleichtert die Migration von Exosomen aus dem Medium in die Saccharoselösung bei gleichzeitiger Beibehaltung der
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