Isolierung von Nierenzellen an der Maus: Eine Technik zur Isolierung und Erzeugung einer Primärkultur von tubulären Nierenepithelzellen

Um renale tubuläre Epithelzellen oder TEC zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme einer frisch isolierten Mausniere in einer Petrischale. Ziehen Sie die Nierenkapsel ab - die dünne äußere Schicht, die die Niere umgibt - und entfernen Sie das Mark oder den innersten Teil der Niere, wobei die Rinde, die den Tubulus und die röhrenförmigen Epithelzellen enthält, übrig bleibt.

Hacken Sie die restlichen Nierenteile in kleine Stücke und inkubieren Sie sie in einem warmen Verdauungspuffer, der das Enzym Kollagenase enthält. Kollagenase baut das Kollagenprotein ab, das das Nierengewebe zusammenhält, und gibt die Nierentubuli und die Nierenzellen in Suspension frei.

Filtern Sie die Suspension, um unverdautes Nierengewebe zu entfernen. Geben Sie anschließend vorgekühlte Nährmedien zum Filtrat. Die niedrigere Temperatur neutralisiert die Kollagenase und stoppt die weitere Verdauung des Gewebes. Zentrifugieren Sie das Filtrat bei niedriger Geschwindigkeit, damit sich die dichteren Tubuli und Röhrenzellen absetzen können, während andere Zelltypen und Verunreinigungen in der Schwebe bleiben.

Entfernen Sie diese unerwünschte Überstandsfraktion und fügen Sie Nährmedien hinzu, um das Pellet wied