Hydrodynamische Injektion des Nierenbeckens: Eine Technik zur direkten Abgabe von DNA in Nierenzellen des Mausmodells

Um Plasmid-DNA direkt in die Nierenzellen der Maus zu bringen, platzieren Sie zunächst eine anästhesierte Maus in einer seitlichen Position. Bereiten Sie die Maus vor, indem Sie ihr Rückenfell von der Seite entfernen. Lokalisieren Sie eine geeignete Schnittstelle in der linken Flanke, unterhalb des Brustkorbs.

Machen Sie einen kleinen Schlitz in die Haut und die darunter liegenden Muskelschichten. Üben Sie anschließend sanften Druck auf die Bauchhöhle aus, um die Niere durch die Inzisionsstelle freizulegen. Entfernen Sie teilweise das darüber liegende perinephrische Fettgewebe, um das Nierenbecken sichtbar zu machen.

Nehmen Sie nun eine Spritze mit Plasmid-DNA in einem hydrodynamischen Verabreichungspuffer. Führen Sie die Nadel direkt in das Nierenbecken ein - einen dreieckigen, erweiterten Teil des Harnleiters in der Niere. Injizieren Sie die Plasmidlösung schnell, so dass die DNA direkt das Nierenparenchym erreicht - den funktionellen Teil der Niere, der das Blut filtert.

Die schnelle Abgabe eines großen Flüssigkeitsvolumens durch das Nierenbecken baut einen hohen Druck auf, der vorübergehende Poren in der Plasmamembran der Nierenparenchymzellen erzeugt. Dies erleichtert den Eintritt von Plasmiden in die Zellen. Schließlich schließen sich diese Poren und schließen die Plasmide in den Zellen ein.

Ziehen Sie zum Schluss die Nadel zurück und bringen Sie die Niere wieder in die Bauchhöhle zurück. Vernähen Sie die Haut- und Muskelschichten an der Inzisionsstelle.

Tragen Sie sterile OP-Handschuhe und tupfen Sie das Tier von der Seite des Schnitts aus dreimal in kreisenden Bewegungen mit einem neuen Chlorhexidin/Alkohol-Tupfer ab. Suchen Sie nun die Inzisionsstelle. Kneifen Sie die Haut mit einer Pinzette zusammen und schneiden Sie die Hautschicht mit einer Schere etwa 1 Zentimeter von der Wirbelsäule entfernt unterhalb des Brustkorbs ab. Mache einen weiteren Mittelschnitt unten in der Muskelschicht. Lokalisieren Sie die Niere und legen Sie sie, ohne sie zu berühren, vorsichtig aus der Bauchhöhle frei, indem Sie mit den Fingern einen gleichmäßigen, sanften Druck auf den Bauch ausüben.

Die Niere freizulegen ist manchmal schwierig. Üben Sie sanften Druck auf den Bauch und die Wirbelsäule aus, um eine Schädigung der Milz zu vermeiden. Wenn andere Organe als die Niere austreten, führen Sie diese bei Bedarf mit einer geschlossenen Pinzette vorsichtig in die Körperhöhle zurück.

Trennen Sie dann die Niere vorsichtig vom umgebenden Fett, gerade so weit, dass das Nierenbecken sichtbar ist, das als kleiner weißer Punkt zu sehen ist. Nachdem Sie das Nierenbecken sichtbar gemacht haben, drücken Sie mit einer geschlossenen Pinzette auf die rechte Seite der Niere, so dass das Nierenbecken im Blick bleibt. Fassen Sie dann die geladene Insulinspritze in der rechten Hand, indem Sie sie parallel zur Arbeitsfläche halten, und führen Sie die Nadel vorsichtig in das Nierenbecken ein.

Sobald die Nadel eingeführt ist, injizieren Sie die Lösung schnell innerhalb von 3 Sekunden. Lassen Sie die Nadel etwa 10 Sekunden lang an Ort und Stelle, um einen Rückfluss der Lösung zu verhindern. Entfernen Sie dann langsam und vorsichtig die Nadel und bringen Sie das Organ wieder in die Bauchhöhle zurück, indem Sie die Inzisionsstelle mit einer geschlossenen Pinzette sanft dehnen. Vernähen Sie nun die Muskelschicht mit 5-0 resorbierbaren Nähten und platzieren Sie 2 bis 4 unabhängige Knoten. Auf ähnliche Weise vernähen Sie die Hautschicht mit 5-0 oder 6-0 nicht resorbierbaren Nylonnähten und platzieren Sie 2 bis 4 unabhängige Knoten.