Hydrodynamische Injektion des Nierenbeckens: Eine Technik zur direkten Abgabe von DNA in Nierenzellen des Mausmodells

Um Plasmid-DNA direkt in die Nierenzellen der Maus zu bringen, platzieren Sie zunächst eine anästhesierte Maus in einer seitlichen Position. Bereiten Sie die Maus vor, indem Sie ihr Rückenfell von der Seite entfernen. Lokalisieren Sie eine geeignete Schnittstelle in der linken Flanke, unterhalb des Brustkorbs.

Machen Sie einen kleinen Schlitz in die Haut und die darunter liegenden Muskelschichten. Üben Sie anschließend sanften Druck auf die Bauchhöhle aus, um die Niere durch die Inzisionsstelle freizulegen. Entfernen Sie teilweise das darüber liegende perinephrische Fettgewebe, um das Nierenbecken sichtbar zu machen.

Nehmen Sie nun eine Spritze mit Plasmid-DNA in einem hydrodynamischen Verabreichungspuffer. Führen Sie die Nadel direkt in das Nierenbecken ein - einen dreieckigen, erweiterten Teil des Harnleiters in der Niere. Injizieren Sie die Plasmidlösung schnell, so dass die DNA direkt das Nierenparenchym erreicht - den funktionellen Teil der Niere, der das Blut filtert.

Die schnelle Abgabe eines großen Flüssigkeitsvolumens durch das Nierenbecken baut einen hohen Druck auf, der vorübergehende Poren in der Plasmamembran der Nierenparenchymzellen erzeugt. Dies erleichtert den Eint