JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:47 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer immortalisierten hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzelle, iHSPC, Kultur in Medien, die spezifisches Steroidhormon und hämatopoetisches Zytokin enthalten und die Zellproliferation in einem undifferenzierten Zustand regulieren. Fügen Sie ein geeignetes kationisches Polymer und lentivirale Vektoren hinzu.
Rekombinante Viren tragen kodierende Sequenzen für kurze Haarnadel-RNAs, shRNAs, die auf ein spezifisches Wirtsgen und ein Antibiotikaresistenz-Markergen gerichtet sind.
Zentrifugieren Sie, um Zellen und Viren zu sedimentieren. Während der Inkubation neutralisieren kationische Polymere die zellulären Membranladungen und verstärken so die Virusbindung. Nach der Membranfusion werden virales Erbgut und Enzyme in das zelluläre Zytoplasma freigesetzt. Das virale Genom wird rückwärts transkribiert, wandert in den Zellkern und integriert sich in das Wirtsgenom.
Unter dem Einfluss eines spezifischen Promotors in dem Konstrukt wird das shRNA-Genkonstrukt, das eine Ziel-mRNA-Matching-Sequenz, ein Schleifensegment und eine weitere komplementäre Sequenz zur ersten umfasst, transkribiert, wobei shRNA mit einem Schleifensegment aus ungepaarten Nukleotiden gebildet wird. N
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos