Calciumabhängige hydrophobe Interaktionschromatographie: Eine Technik zur Aufreinigung von Calcium-bindenden Proteinen auf der Grundlage hydrophober Wechselwirkungen

Die kalziumabhängige hydrophobe Interaktionschromatographie ist eine Technik zur Trennung von kalziumbindenden Proteinen von anderen nicht kalziumbindenden Proteinen in einer Probe.

Nehmen Sie zunächst eine vormontierte Chromatographiesäule, die eine Matrix aus vernetzten Agarosekügelchen enthält, die mit hydrophoben Phenylgruppen derivatisiert sind, um Wechselwirkungen mit den Zielproteinen zu erleichtern. Äquilibrieren Sie es mit einem Bindungspuffer, der eine sehr hohe Konzentration an Calciumionen enthält, um eine maximale Interaktion zwischen Harz und Zielprotein während der anschließenden Probenbeladung

zu erzielen.

Es wird eine Probe entnommen, die das dialysierte Proteingemisch enthält, und diese mit einer Calciumchloridkonzentration ergänzt, die auch im Bindungspuffer für die Säulenäquilibrierung verwendet wird. Dadurch wird die Proteinbindung an die Säule maximiert.

Kalziumionen binden an bestimmte Proteine im Lysat und induzieren eine Konformationsänderung in diesen Proteinmolekülen, wodurch ihre hydrophoben Regionen freigelegt werden.

Filtern Sie das Gemisch, um Verunreinigungen und Zuschlagstoffe zu trennen und zu verhindern, dass sie die Säule verstopfen. Laden Sie di