Größenausschlusschromatographie-basierte Trennung bakterieller extrazellulärer Vesikel: Eine Technik zur Trennung heterogener Populationen gramnegativer bakterieller Vesikel der äußeren Membran anhand ihrer Größe

Unter geeigneten Kulturbedingungen geben gramnegative Bakterien frachttragende Vesikel der äußeren Membran (OMVs) an den Überstand ab. Diese Vesikel sind heterogen große, kleine, kugelförmige Strukturen, die die zelluläre Kommunikation vermitteln.

Um unterschiedlich große Subpopulationen von OMVs zu fraktionieren, nehmen Sie eine leere Größenausschlusschromatographiesäule mit einem geeigneten Filter an der Basis, um die Matrix zu stützen.

Verpacken Sie die Säule mit einer Gelfiltrationsmatrix, die aus chemisch inerten, kugelförmigen Kügelchen mit definierter Porengröße besteht, um sicherzustellen, dass die Größe optimal ist, um große OMVs vom Eindringen auszuschließen. Äquilibrieren Sie die Säule mit einem geeigneten Puffer, um ein Austrocknen der Kügelchen für eine optimale Reinigung zu verhindern.

Laden Sie den Bakterienkulturüberstand mit unterschiedlich großen Subpopulationen von OMVs, Proteinaggregaten und Nukleinsäuren auf die Oberseite der Säule. Lassen Sie die Proben durch die Schwerkraft laufen.

Während die Proben die Säule passieren, bewegen sich größere OMVs, die nicht in die Poren eindringen können, durch die Zwischenräume zwischen den Gelkügelchen, um zuerst eluiert zu