Fluoreszenzdetektionsgrößenausschlusschromatographie: Eine Technik zur Identifizierung der Integrität fluoreszierender Membranproteine bei der Detergenziensolubilisierung

Bakterielle integrale Membranproteine, die an Lipid-Doppelschichtmembranen verankert sind, erleichtern den Transport von Molekülen durch Membranen und die Transduktion von Signalen. Für Strukturstudien werden spezifische integrale membranrekombinante Proteine mit dem fusionierten grün fluoreszierenden Protein GFP überexprimiert.

Um die Stabilität rekombinanter Membranproteine nach der Detergenzsolubilisierung zu bewerten, erhalten Sie eine bakterielle Membranfraktion, die GFP-markierte integrale Membranproteine enthält. Fügen Sie ein nichtionisches Reinigungsmittel hinzu. Über die kritische Konzentration hinaus bildet das Waschmittel Mizellen.

Mizellen interagieren mit Lipidmembranen und Membranproteinen, lösen die Membranen und bilden Protein-Detergens-Komplexe. Darüber hinaus können die hydrophoben Transmembranregionen von Membranproteinen unmaskiert bleiben, was zu einer Proteinaggregation führt. Darüber hinaus können freie GFPs aufgrund des Abbaus von Membranproteinen entstehen.

Zentrifugieren Sie die Mischung. Der mit Detergenzien gelöste Fraktion, der Überstand enthält, wird aufgefangen.

Bauen Sie eine Größenausschluss-Chromatographiesäule zusammen, die mit einem Fluoreszenzd