DFE-basierte Affinitätschromatographie: Eine Technik zur Aufreinigung von monoklonalen 2F5-Antikörpern aus einer Rohprobe unter Verwendung von Elutionsbedingungen mit hoher Ionenstärke

Das DFE- oder DsRed-2F5-Epitop ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das aus DsRed, einem fluoreszierenden Protein, und dem 2F5-Epitop - einem Segment des HIV-1-Hüllglykoprotein-Antigens - besteht. Dieses Epitop hat eine hohe Affinität zu seinem Paratop - einer Region in der komplementären bestimmenden Region auf dem monoklonalen 2F5-Antikörper.

Um monoklonale 2F5-Antikörper aus einer Rohprobe zu reinigen, entnehmen Sie eine Säule, die mit porösen Harzkügelchen gefüllt ist, die immobilisierte DFE-Affinitätsliganden auf ihrer Oberfläche enthalten. Spülen Sie die Säule mit einem geeigneten Äquilibrierungspuffer, um den pH-Wert zu halten und unspezifische Wechselwirkungen zwischen den Probenkomponenten und dem Harz in den nachfolgenden Schritten zu verhindern.

Laden Sie die Probe mit den monoklonalen 2F5-Zielantikörpern in die Säule. Nach und nach beginnen die Antikörper in der Probe durch die Säule oder die stationäre Phase zu fließen.

Während des Flusses interagieren die Antikörper reversibel mit den DFE-Affinitätsliganden, die in der stationären Phase immobilisiert sind. Bei diesen Wechselwirkungen bindet das Paratop auf dem 2F5-Antikörper spezifisch an sein komplementäres Epitop a