JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:04 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Monoschicht aus Epithelzellen in einem geeigneten Kulturmedium. Diese Zellen exprimieren Integrine - membranübergreifende Oberflächenrezeptoren. Das Kulturmedium enthält epithelialzellsezerniertes Fibronektin - ein Glykoprotein.
Geben Sie eine Suspension von Staphylococcus aureus - einem grampositiven pathogenen Bakterium - in die Kulturplatte. Diese Bakterien enthalten Fibronektin-bindende Proteine (FnBPs), die in ihrer Zellwand verankert sind.
Inkubieren Sie die Platte, um eine bakterielle Infektion zu initiieren, wobei das Fibronektin an das FnBP der Bakterien und die Integrine auf den epithelialen Wirtszellen bindet. Diese dreigliedrige FnBP-Fibronektin-Integrin-Interaktion vermittelt die bakterielle Internalisierung im Wirt.
Behandeln Sie die Zellen mit Lysostaphin - einem Endopeptidase-Enzym - und inkubieren Sie. Lysostaphin dringt selektiv in die Zellwände extrazellulärer Bakterien ein. Es spaltet die Pentaglycinbrücken in den Peptidoglykanen und lysiert sie so, während die intrazellulären Bakterien vor Lysostathin geschützt bleiben.
Ergänzen Sie die Kultur mit einem proteolytischen Enzym, um das verbleibende Lysostathin zu deaktivieren und zu verhinde
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