JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:03 Min. • July 8th, 2025
Im Gewebe existiert Eisen, ein essentieller Mineralstoff, der für verschiedene Stoffwechselprozesse von entscheidender Bedeutung ist, normalerweise in Form von Hämoproteinen und Nicht-Häm-Eisenproteinen. Hämoproteine umfassen Eisen- oder Häm-Eisen, das an Porphyrinringe gebunden ist, während Nicht-Häm-Eisen-Proteine die Porphyrin-Ringstruktur fehlen und hauptsächlich Eisen oder Nicht-Häm-Eisen enthalten.
Um den Nicht-Häm-Eisengehalt im Lebergewebe von Mäusen abzuschätzen, behandeln Sie ein getrocknetes, geerntetes Lebergewebefragment der Maus mit niedrigen Konzentrationen von Salzsäure und Trichloressigsäure. Inkubieren Sie bei hohen Temperaturen, um das Gewebe zu verdauen und die säureinduzierte Proteinfällung zu erleichtern.
Aufgrund der niedrigen Säurekonzentrationen wird Nicht-Häm-Eisen aus den zugehörigen Proteinen freigesetzt. Häm-Eisen, das an den Porphyrinring gebunden ist, bleibt davon unberührt.
Nach dem Abkühlen wird das gewünschte Volumen des Überstands, der Nicht-Häm-Eisen enthält, in eine Multi-Well-Platte überführt. Den chromogenen Eisenchelator, Bathophenanthrolinsulfonat, BPS, ergänzt mit Thioglykolsäure, einem Reduktionsmittel, in einen geeigneten Puffer geben und
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