Resorptionsgruben-Assay: Eine In-vitro-Technik zur Quantifizierung der Calciumresorptionsaktivität reifer Osteoklasten unter Verwendung von Calciumphosphat-beschichteten Kulturplatten

Osteoklasten, mehrkernige Makrophagen, erleichtern die Knochenresorption - den Abbau von Knochengewebe und die Freisetzung von Knochenmineralien.

Um die Osteoklastenresorption in vitro zu quantifizieren, kultivieren mononukleäre Zellen des menschlichen peripheren Blutes in einem Makrophagen-Kolonie-stimulierenden Faktor, M-CSF, der Medien für die Differenzierung in Osteoklasten-Vorläuferzellen und die Bindung enthält. Entnehmen Sie die Osteoklasten-Vorläuferzellen und die Zentrifuge.

Pipettieren Sie die resuspendierte Zellsuspension in Medien, ergänzt mit M-CSF und Rezeptoraktivator des Kernfaktor-Kappa-B-Liganden, RANKL, in Multi-Well-Plattenvertiefungen, die mit Calciumphosphat beschichtet sind und anorganische Knochenkomponenten nachahmen. M-CSF und RANKL bewirken die Differenzierung der Osteoklastenvorläufer und die Fusion zu Osteoklasten, wodurch die Resorption aktiviert wird.

Aktivierte Osteoklasten heften sich an die Calciumphosphat-Beschichtung, reorganisieren ihr Zytoskelett zu einer aktinreichen Dichtungszone und entwickeln gekräuselte Ränder, die Protonen und saure Hydrolasen sezernieren. Das entstehende saure Milieu löst die Calciumphosphatbeschichtung auf, setzt Calciu