JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:25 Min. • July 8th, 2025
In stoffwechselaktiven Zellen werden kohlenstoffhaltige Substrate über eine Reihe von biochemischen Reaktionen oxidiert, um Energie zu erzeugen und Kohlendioxid als Nebenprodukt freizusetzen.
Um die Geschwindigkeit der Substratoxidation zu bestimmen, beginnen Sie mit einer adhärenten Kultur der gewünschten undifferenzierten Zellen. Die Zellen werden in einem Medium mit einem geeigneten Substrat ergänzt, das vierzehn radioaktiven Kohlenstoff im Rückgrat enthält, und inkubieren.
Die Zellen verbrauchen das Substrat und oxidieren es, um radioaktiv markiertes Kohlendioxid freizusetzen, das aus den Zellen in das umgebende Medium diffundiert.
Dieses Medium wird in eine Gasfanganordnung überführt, die Perchlorsäure enthält, um die Reaktion zu löschen. Dieses Rohr enthält ein mit Natriumhydroxid getränktes Filterpapier, das in die Röhrchenkappe eingepasst ist. Schließen Sie die Kappe und inkubieren Sie.
Während der Inkubation wird das Kohlendioxid in seiner gasförmigen Form im Inneren des Rohrs freigesetzt. Natriumhydroxid absorbiert das radioaktiv markierte Kohlendioxid und schließt es im Filterpapier ein. Füllen Sie dieses Filterpapier in ein Fläschchen mit einem Szintillationscocktail un
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