JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:10 Min. • July 8th, 2025
Septine sind Zytoskelettproteine, die eine GTP-Bindungsdomäne umfassen, die von terminalen Amino- und Carboxyldomänen flankiert wird, mit der inhärenten Fähigkeit, sich selbst zu Filamenten und Strukturen höherer Ordnung an der inneren Plasmamembran für verschiedene zelluläre Funktionen zusammenzusetzen.
Um Septin-Membran-Wechselwirkungen in vitro mit Hilfe einer biologischen Membrannachahmung zu untersuchen, besorgen Sie sich ein geschnittenes Mikrozentrifugenröhrchen. Tragen Sie UV-Kleber auf den ungeschnittenen, flachen Rand auf und positionieren Sie ihn auf einem plasmabehandelten, hydrophilierten Glasdeckglas. Bei Einwirkung von ultraviolettem Licht härtet der Klebstoff aus und es entsteht eine offene Reaktionskammer.
Monodispergierte zwitterionische unilamellare Lipidvesikel der gewünschten Lipidzusammensetzung, ergänzt mit mono- und zweiwertigem kationenhaltigem Puffer, werden in die Kammer überführt. Kationen erleichtern die Adsorption und Ansammlung von Lipidvesikeln auf dem Deckglas. Schütteln Sie die Kammer vorsichtig, leiten Sie einen Vesikelbruch ein und inkubieren Sie.
Die geplatzten Vesikel entfalten sich und verschmelzen über ihre hydrophilen Kopfgruppen mit dem Dec
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