Sphärisch gestützter Lipid-Doppelschicht-Assay: Eine Technik zur Beobachtung der Septin-Assemblierung auf Mikrosphären

Septine sind wichtige Proteine des Zytoskeletts, die an gekrümmte Plasmamembranoberflächen binden.

Um die In-vitro-Septin-Assemblierung auf Mikrosphären zu beobachten, nehmen Sie zunächst eine Suspension aus gleichmäßig großen, mikroskopisch kleinen Siliziumdioxidkügelchen, die als fester Träger für die Doppelschichtbildung dienen. Wirbeln Sie diese Suspension ein, um alle Perlencluster zu brechen.

Ergänzen Sie es mit kleinen einlamellären Vesikel, SUVs - kugelförmigen Vesikel, die von einer einzigen Lipiddoppelschicht umgeben sind. Inkubieren Sie unter ständigem Rühren, um das Absetzen von Mikrokügelchen zu verhindern.

Während der Inkubation erleichtern die äußeren polaren Kopfgruppen die Adsorption von SUVs an der Oberfläche der hydrophilen Mikrosphäre. Diese Wechselwirkung führt zum Bruch von SUVs, gefolgt von der Fusion von SUV-Lipiden auf der gekrümmten Mikrosphärenoberfläche als durchgehende Schicht, was zur Bildung einer kugelförmigen, gestützten Lipiddoppelschicht, SLB, führt.

Waschen, um überschüssige ungebundene Lipide zu entfernen, und in Reaktionspuffer resuspendieren. Die kugelförmige SLB-Suspension wird auf einen kleinen Bereich einer mit Polyethylenglykol beschichtet