Bead-Sprouting-Assay für die Beurteilung der Angiogenese im Frühstadium: Ein In-vitro-Bead-basiertes Modell zur Untersuchung der Endothelkeimung in Gegenwart von Perizyten

Unter Angiogenese versteht man die Bildung neuer Blutgefäße aus den bestehenden Blutgefäßen während entwicklungsbedingter und pathologischer Zustände. Eine umfassende Kommunikation zwischen den Endothelzellen, die die innere Oberfläche der Blutgefäße auskleiden, und den umgebenden Perizyten - unterstützenden Zellen an der Außenseite der Blutgefäße - ist entscheidend für die Angiogenese.

Um die In-vitro-Angiogenese zu untersuchen, beginnen Sie mit Endothelzellen und mit Perizyten beschichteten Microcarrier-Kügelchen, die in einer Fibrinogenlösung suspendiert sind - einem löslichen Glykoprotein, das als Fibrinvorläufer fungiert.

Pipettieren Sie nun die Bead-Suspension in eine Kulturplatte, die eine Lösung von Thrombin - einem proteolytischen Enzym - enthält, und inkubieren Sie. Thrombin bindet an das Fibrinogenmolekül, wodurch seine Spaltung unlösliche Fibrinmonomere bildet, wodurch polymeres Fibringel entsteht. Dieser Schritt sorgt für die Einbettung von zellbeschichteten Kügelchen in das Fibringel.

Als nächstes wird eine Kultur von Fibroblasten - Vorläuferzellen des Bindegewebes - auf das Fibringel aufgetragen und inkubiert, um die Aktivierung der Fibroblasten zu ermöglichen.

Währe