Turbidimetrischer Limulus-Amöbozyten-Lysat-Assay: Eine Technik zum Nachweis und zur Quantifizierung von Endotoxin-Kontamination in nanoformulierten Arzneimitteln

Endotoxin, ein gramnegatives bakterielles Toxin, das auf der äußeren Membran vorhanden ist, ist ein Lipopolysaccharid, LPS, das hauptsächlich aus Lipiden und Polysacchariden, einschließlich Lipid A und O-Antigen, besteht. Wenn es während der Infektion freigesetzt wird, wird es vom Immunsystem erkannt und löst zytokinbasierte Entzündungsreaktionen aus.

Zur Abschätzung der Endotoxinkontamination in einer liposomalen Arzneimittel-Nanoformulierung unter Verwendung des Limulus-Amöbozytenlysats, LAL-Assays, bereiten Sie Reaktionsröhrchen vor, eines mit dem Arzneimittel und das andere mit dem Arzneimittel, das mit einer bekannten Endotoxinkonzentration versetzt ist.

Fügen Sie ein LAL-Reagenz hinzu, das Proteinlysat enthält, das aus Pfeilschwanzkrebsen, Limulus-Polyphem, Blutzellen oder Amöbozyten gewonnen wird. Das Lysat enthält inaktive Serinproteasen - Faktor B, Faktor C, Prochrominnungsenzym - und ein Gelgerinnungsprotein, Koagulogen.

Wirbeln Sie die Röhrchen und laden Sie sie in ein Trübungsmessgerät, um die Trübung der Lösungen zu messen.

In Gegenwart von kontaminierendem LPS, das an liposomale Arzneimittel gebunden ist, wird der LPS-empfindliche Faktor C autokatalytisch aktiviert, d