JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:49 Min. • July 8th, 2025
Kohlenhydratabbauende Enzyme zerlegen die komplexen Polysaccharide in kleinere Oligosaccharide.
Um die Abbauaktivität des Enzyms zu screenen, beginnen Sie mit der Einnahme mehrerer chromogener Polymer-Hydrogele, CPH, die durch Färben von Polysacchariden mit verschiedenfarbigen Chlortriazin-Farbstoffen hergestellt werden. Jedes Polysaccharid wird dann chemisch zu Hydrogel vernetzt – einem synthetischen Substrat für den enzymatischen Abbau.
Dispensieren Sie nun verschiedene CPH-Substrate in unterschiedliche Vertiefungen einer porösen Reaktionsplatte. Fügen Sie eine Aktivierungslösung hinzu und inkubieren Sie sie, um eine optimale Aktivierung der Substrate zu gewährleisten.
Legen Sie die Assay-Platte über eine leere Produktplatte. Zentrifugieren Sie die Platten zusammen bei niedriger Geschwindigkeit, um eine effiziente Entfernung der Aktivierungslösung durch die Poren der Reaktionsplatte zu ermöglichen.
Ergänzen Sie als Nächstes alle Vertiefungen der Reaktionsplatte mit der gleichen Art von kohlenhydratabbauendem Enzym in einem geeigneten Puffer, der einen optimalen pH-Wert für die enzymatische Aktivität aufrechterhält. Verschließen Sie die Platte und inkubieren Sie sie unter leichtem
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