Screening von unlöslichen chromogenen biomassebasierten Enzymen: Ein Assay zur Bewertung der Abbauaktivität von pflanzlichen biomasseabbauenden Enzymen

Biomasse ist eine pflanzliche organische Substanz, die hauptsächlich aus komplexen Polysacchariden besteht. Kohlenhydratabbauende Enzyme wirken auf diese Polysaccharide, um kleinere Oligosaccharide zu produzieren.

Um die Abbauaktivität eines Enzyms zu bewerten, beginnen Sie mit der Entnahme verschiedener unlöslicher chromogener Biomasse - ICB-Substrate, die in den Vertiefungen einer porösen Reaktionsplatte vorhanden sind. Diese Substrate werden durch das Färben pflanzlicher Materialien mit einem bestimmten Farbstoff Chlortriazin gewonnen. Die resultierende Biomasse weist farbstoffmarkierte komplexe Polysaccharide auf, die als Substrat für die Enzymaktivität dienen.

Fügen Sie nun eine Pufferlösung hinzu, die ein kohlenhydrathydrolysierendes Enzym enthält. Der Puffer hält den pH-Wert für eine optimale Enzymaktivität aufrecht. Stellen Sie die Reaktionsplatte auf einen Schüttler und inkubieren Sie. Durch ständiges Rühren können die Enzymmoleküle das Zielpolysaccharid im ICB-Substrat erreichen.

Während der Inkubation spaltet das hydrolysierende Enzym kovalente glykosidische Bindungen innerhalb der langkettigen Polysaccharide. Bei der Reaktion entstehen lösliche Oligosaccharide, die an F