Differential Nuclear Staining Assay: Ein Assay zur Bestimmung der Mitokan-Zytotoxizität durch Propidiumiodid und Hoechst-Doppelfärbung

Mitocane sind eine Klasse von Medikamenten, die selektiv die Funktion der Mitochondrien in Krebszellen beeinflussen und Apoptose induzieren.

Um die Zytotoxizität von Mitokanen zu bestimmen, säen Sie eine Zellsuspension mit semi-adhärenten Krebszellen auf eine Multiwell-Platte. Behandeln Sie die Platte mit der gewünschten Mitocan-Lösung und inkubieren Sie.

Mitocan dringt in die Krebszelle ein, um ihre mitochondriale Aktivität zu stören, was schließlich zum Zelltod in Mitocan-empfindlichen Krebszellen führt. Behandeln Sie die Zellen mit einer Färbelösung, die eine Mischung aus Hoechst-Farbstoff und Propidiumiodid enthält.

Hoechst, ein membrandurchlässiger Fluoreszenzfarbstoff, dringt in alle Zellen ein und bindet an den AT-reichen Bereich ihrer DNA, wodurch die Zellkerne lebender und toter Zellen mit einer blauen Fluoreszenz versorgt werden.

Im Gegensatz dazu gelangt Propidiumiodid, ein membranundurchlässiger Fluoreszenzfarbstoff, ausschließlich durch die geschädigten Teile ihrer Membranen in die toten Zellen. Der Farbstoff interkaliert zwischen den DNA-Basen und verleiht den abgestorbenen Zellen eine zusätzliche rote Fluoreszenz. Das Vorhandensein beider Farbstoffe in den Zellkernen