In vitro Glukoseabbau-Assay: Eine fluoreszenzbasierte Methode zur Quantifizierung der zellulären Glukoseaufnahme durch extrazelluläre Glukoseabbaumessung

Glukose, eine primäre zelluläre Energiequelle, gelangt über Glukosetransporterproteine der Zellmembran in die Zellen. Glukose wird im Zytoplasma der Zelle über den glykolytischen Weg zu Pyruvat abgebaut und erzeugt Energie durch Adenosintriphosphat oder ATP für den Zellstoffwechsel.

Um die intrazelluläre Glukoseaufnahme zu messen, beginnen Sie mit einer adhärenten Kultur von Fibroblasten in einer Multi-Well-Platte. Ersetzen Sie das Medium durch glukosefreies Medium und inkubieren Sie. Die Zellen verstoffwechseln die verfügbare Glukose, um Energie zu erzeugen, und erreichen einen Zustand des Glukosemangels.

Ersetzen Sie das Medium in einem Satz Vertiefungen durch glukosefreie Medien, die Insulin, einen Glukoseaufnahmestimulator, und fluoreszierende Desoxyglucose, ein Glukoseanalogon, enthalten. Behandeln Sie einen weiteren Satz Wells mit glukosefreien Medien, die fluoreszierende Desoxyglucose enthalten.

Während der Inkubation stimuliert Insulin die Translokation zusätzlicher Glukosetransporter zur Plasmamembran, was eine erhöhte Aufnahme von fluoreszierender Desoxyglucose in Abwesenheit von Glukose ermöglicht.

Desoxyglucose wird phosphoryliert und von den Zellen nicht weiter verstof