Messung der extrazellulären fluoreszierenden Glukoseanaloga-Depletion: Eine Surrogat-Messtechnik zur Beurteilung der Glukoseaufnahme in Mausorganen ex vivo

In Geweben gelangt extrazelluläre Glukose durch erleichterte Diffusion durch spezifische Glukosetransporter in die Zellen.

Glukose wird im Zytoplasma der Zelle über die Glykolyse, einen Stoffwechselweg, zu Pyruvat abgebaut, wobei Energie in Form von Adenosintriphosphat oder ATP für zelluläre Stoffwechselprozesse erzeugt wird.

Um die Glukoseaufnahme ex vivo zu messen, beginnen Sie mit frisch geerntetem kleinem Lebergewebe von Mäusen. Fügen Sie einen geeigneten Puffer hinzu, um die physiologischen Bedingungen aufrechtzuerhalten.

Übertragen Sie das Gewebe anschließend auf eine Multiwell-Platte mit glukosefreiem Medium. Anschließend erfolgt eine Inkubation in glukosefreien Medien, die mit Desoxyglucose, einem fluoreszenzmarkierten Glukoseanalogon, ergänzt werden. Die geringe Größe des Gewebes ermöglicht den Eintritt von Desoxyglukose.

Desoxyglukose gelangt durch Glukosetransporter in Abwesenheit von Glukose in die Zellen. In den Zellen durchläuft Desoxyglucose eine Phosphorylierung, wird aber nicht weiter verstoffwechselt, was zu einer Akkumulation führt.

Sammeln Sie die Medien mit ungenutzter fluoreszenzmarkierter Desoxyglukose zu den gewünschten Zeitpunkten. Messen Sie mit einem Mikr