ATP-basierter Luciferase-Viabilitäts-Assay: Eine homogene Methode zur Bewertung des wachstumshemmenden Potenzials von Teststoffen auf Tumor-Organoiden

Adenosintriphosphat, ATP, die primäre Energiequelle der Zelle, ist für verschiedene zelluläre Funktionen von entscheidender Bedeutung. Unter Stress wird der intrazelluläre ATP-Spiegel negativ beeinflusst, was ATP zu einem guten Marker für stoffwechselaktive, lebensfähige Zellen macht.

Säen Sie zunächst die Suspension der Tumorzellen in eine schwarzwandige Mikroplatte mit klarem Boden, um die Lichtstreuung während der Lichtintensitätsmessung zu minimieren. Die Mikroplatte besteht aus einer Hydrogel-Beschichtung, die verhindert, dass Zellen an der Platte anhaften, und so eine Zell-zu-Zell-Interaktion und Selbstorganisation zu Tumororganoiden ermöglicht - dreidimensionale Gewebekulturen, die die Mikroumgebung des Tumors nachahmen.

Behandeln Sie anschließend mit einer Testverbindung. Die Testsubstanz interagiert mit den Organoidzellen und kann je nach ihrem wachstumshemmenden Potenzial die energieproduzierenden Stoffwechselprozesse stören, was zu einer intrazellulären ATP-Depletion führt.

Nach der Behandlung wird ein einstufiges Reagenz hinzugefügt, das aus Detergenzien, ATPase-Hemmern, dem Enzym Luciferase, Luciferase-spezifischem Substrat, Luciferin und Magnesiumionen besteht. Inkubi