Der Luciferase-Assay: Ein Hochdurchsatz-Assay zur Messung von Lumineszenzsignalen mit Hilfe von Bioreportern auf Basis von Nanoluziferase-Systemen

Luciferase ist ein Enzym, das sein Substrat oxidiert, um ein biolumineszierendes Produkt zu bilden.

Diese Eigenschaft der Luziferase ist hilfreich für die Gestaltung eines Nanoluziferase-basierten Reportersystems, in dem die gespaltene Version des Enzyms verwendet wird. In diesem System besitzen die kleineren und größeren Fragmente eine hohe Bindungsaffinität zueinander und können das funktionsfähige Enzym rekonstituieren.

Um das auf Nanoluziferase basierende System zum Nachweis des Zielproteins - der Rezeptorbindungsdomäne des SARS-CoV-2-Spike-Glykoproteins - zu verwenden, beginnen Sie mit einer Kulturschale mit adhärenten Zellen. Diese Zellen enthalten ein Plasmid, das für das Zielprotein kodiert, in Verbindung mit einer Sequenz, die spezifisch für das kleinere Fragment der manipulierten Nanoluziferase ist.

Nach der Expression produzieren die kultivierten Zellen Bioreporter - rekombinante Zielproteine, die mit dem kleineren Fragment der Luciferase fusioniert sind. Behandeln Sie die Zellen mit einem Lysepuffer und inkubieren Sie sie unter Rührung. Die Pufferkomponenten lysieren die Zellen schnell und geben den zellulären Inhalt, einschließlich der Bioreporter, an den Überstand ab.