Zellbasierter AAV-neutralisierender Antikörper-Assay: eine kolorimetrische Technik zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen spezifische Adeno-assoziierte Viren im Serum

Rekombinante Adeno-assoziierte Viren, rAAVs, gentechnisch veränderte, unbehüllte, einzelsträngige DNA-Viren, sind vielversprechende therapeutische Genträger.

rAAVs binden an die Membranrezeptoren der Zielzellen und durchlaufen eine Clathrin-vermittelte Endozytose, die die nukleäre Abgabe des rAAV-Genoms und die therapeutische Genexpression erleichtert. Neutralisierende Antikörper des Immunsystems, die gegen rAAVs gerichtet sind, binden jedoch an das spezifische rAAV-Epitop und stören die Zellmembranbindung, den Zelleintritt und den Gentransfer.

Um neutralisierende Antikörper gegen spezifische rAAVs im Schafserum nachzuweisen, erhalten Sie zunächst geeignete Konzentrationen von verdünntem Serum. Fügen Sie rekombinante AAVs hinzu, die das humane plazentare alkalische Phosphatase-Gen hPLAP exprimieren. Lassen Sie neutralisierende Antikörper AAVs binden und neutralisieren.

Diese Mischung wird in die Vertiefungen einer Multi-Well-Platte mit adhärenter humaner Epithelzellkultur überführt. Nach der Inkubation durchlaufen AAVs eine zelluläre Endozytose. Transduzierte Zellen exprimieren zellmembrangebundenes hPLAP. Neutralisierte AAVs können jedoch nicht in die Zellen eindringen.

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