In-vitro-Persister-Assay: Eine Methode zur Bewertung der Wirkung von Osmolyten auf die bakterielle Persistenz

Wenn sie schädlichen Umweltbedingungen ausgesetzt werden, gelangt eine Untergruppe von Bakterien in einen Zustand geringer Stoffwechselaktivität und entzieht sich so den schädlichen Auswirkungen. Diese Bakterien, die als Persister bezeichnet werden, können eine vorübergehende Exposition gegenüber hohen Konzentrationen von Antibiotika tolerieren.

Um die Wirkung von Osmolyten - kleinen organischen gelösten Stoffen - auf die bakterielle Persistenz zu untersuchen, wird zunächst eine Exponentialphase-Bakterienzellkultur mit bereits vorhandenen Persisteren unterhalb der Nachweisgrenze erhalten, die in Medien suspendiert sind.

Als nächstes wird die Suspension in osmolythaltige Vertiefungen einer Microarray-Platte überführt. Halten Sie eine Reihe von Vertiefungen ohne Osmolyt als Kontrolle. Versiegeln Sie die Platte mit einer gasdurchlässigen Membran, um eine schnelle Gasdiffusion für das Zellwachstum und die Inkubation zu ermöglichen.

Die Osmolyten im Medium induzieren in geeigneten Konzentrationen osmotischen Stress, der einige Zellen dazu veranlasst, ihren Zellstoffwechsel von schnellem zu langsamem Wachstum umzuprogrammieren und Persister zu bilden.

Übertragen Sie nun die mit Osmolyten