JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:03 Min. • July 8th, 2025
Die zelluläre Proteinhomöostase oder Proteostase beinhaltet die Regulation der Proteinfaltung und -funktion sowie den Abbau fehlgefalteter Proteine. Während des Alterns nimmt die Proteostase-Maschinerie ab, was dazu führt, dass sich falsch gefaltete Proteine ansammeln und weiter aggregieren, was zu zellulären Funktionsstörungen führt.
Um den altersassoziierten Rückgang der Proteostase zu bestimmen, beginnen Sie mit entwicklungssynchronisierten, adulten transgenen Caenorhabditis elegans.
Die Muskelzellen dieser Würmer exprimieren Proteine mit abnormal expandiertem Polyglutamin oder PolyQ, Wiederholungen, die mit einem fluoreszierenden Tag verschmolzen sind. PolyQ-Proteine neigen zur Fehlfaltung und können daher bei Akkumulation Aggregate bilden.
Die Würmer werden auf einen Objektträger mit einem Agarose-Pad übertragen und mit einer geeigneten Chemikalie für die Bildgebung lebender Zellen immobilisiert. Visualisieren Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die Körperwandmuskulatur der Würmer über einen bestimmten Zeitraum, um die hellen, fluoreszierenden Foki-Signale zu bestimmen, die den fluoreszierenden polyQ-Aggregaten entsprechen.
Aufgrund des altersbedingten Rückgangs der Proteostase
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