Bakterieller Co-Inkubations-Assay: Eine auf Fluoreszenzmikroskopie basierende Technik zur Visualisierung der intraspezifischen bakteriellen Konkurrenz auf Einzelzellebene
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Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:55 Min. • July 8th, 2025
Die intraspezifische Konkurrenz zwischen zwei Bakterienstämmen führt dazu, dass der Inhibitorstamm toxische Effektormoleküle freisetzt, die die Zielpopulation töten.
Um kompetitive Wechselwirkungen zwischen zwei gramnegativen Bakterienstämmen sichtbar zu machen, beginnen Sie mit einer Co-Kultur, die einen Inhibitor und einen Zielstamm in gleichen Mengen enthält.
Beide Stämme sind so konstruiert, dass sie verschiedenfarbige fluoreszierende Proteine exprimieren, um sie während der Bildgebung visuell zu unterscheiden. Konzentrieren Sie die Kultur, um den Zell-zu-Zell-Kontakt zwischen den Bakterienstämmen zu maximieren. Platzieren Sie die Mischkultur auf einem Deckglas, das am Boden einer Schale platziert ist.
Legen Sie ein verfestigtes Agarose-Pad über die Stelle, damit sich die Bakterien immobilisieren können, und decken Sie es mit einem weiteren Deckglas ab. Inkubieren, um das Bakterienwachstum zu ermöglichen und die Bedingungen des Bakteriengedränges zu simulieren.
Die Zellhülle des inhibitorischen Stammes enthält ein spezialisiertes Sekretionssystem - das Sekretionssystem vom Typ sechs oder T6SS. Es besteht aus einem Membrankomplex, einer Grundplatte und einem Innenrohr, das von e
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