Amplifizierter lumineszierender homogener Proximity-Assay: Ein bead-basierter Proximity-Assay zum Screening kleiner Moleküle, die Protein-Protein-Wechselwirkungen hemmen

In biologischen Systemen ist die Nähe eines Proteins zu seinem spezifischen Partner eine entscheidende Determinante für eine erfolgreiche Protein-Protein-Interaktion. Wenn kleine hemmende Moleküle vorhanden sind, können sich diese Proteine nicht nahe beieinander bewegen, was ihre Wechselwirkungen stört.

Um inhibitorische Moleküle auf störende Wechselwirkungen zwischen zwei Proteinen - einem Chaperon und einem Co-Chaperon - zu untersuchen, nehmen Sie eine Multi-Well-Platte, die verschiedene kleine Moleküle enthält. Ergänzen Sie die Vertiefungen mit Spenderperlen, an deren Oberflächen Co-Chaperone befestigt sind. Diese Kügelchen enthalten Photosensibilisatoren für den Chemilumineszenz-Assay.

Fügen Sie eine Aufschlämmung von Akzeptorkügelchen hinzu, die an die vom Chaperon abgeleiteten Peptidsequenzen konjugiert sind, die spezifisch an das Co-Chaperon binden. Die Kügelchen enthalten einen Farbstoff auf Thioxenbasis und Fluorophore, die für die Visualisierung unerlässlich sind.

In Vertiefungen mit nicht-inhibitorischen Molekülen ziehen hohe Affinitäten zwischen den Chaperon-bindenden Peptiden und Co-Chaperonen die Akzeptor- und Donorkügelchen an. Während die Kügelchen entfernt bleiben,