Virus Plaque Assay: Eine Technik zur Messung des infektiösen Herpes-simplex-Virus durch Quantifizierung von Plaques, die in Monolayern von virusinfizierten Zellen gebildet werden

Bereiten Sie zunächst serielle Verdünnungen des Herpes-simplex-Virus, eines behüllten infektiösen Virus, in Puffer vor.

Besorgen Sie sich eine Multi-Well-Platte, die eine Monoschicht aus virusanfälliger Epithelzellkultur enthält. Ersetzen Sie ein bestimmtes Medienvolumen durch verdünnte Virussuspensionen, um eine gleichmäßige Monolayer-Abdeckung zu gewährleisten. Lassen Sie das Virus an der Zelloberfläche adsorbieren.

Entfernen Sie alle nicht adsorbierten Viren. Decken Sie die Zellmonoschicht mit methylcellulosehaltigen Medien ab und bilden Sie eine halbfeste Überlagerung.

Bei der Inkubation verschmelzen die Virushülle und die Zellmembran und geben das virale Nukleokapsid, das das doppelsträngige Genom umschließt, in das Zytoplasma ab. Darüber hinaus wird das virale Genom in den Zellkern freigesetzt.

Unter Verwendung der zellulären Maschinerie und des Virionproteins des Wirts exprimiert das virale Genom unmittelbar frühe virale Proteine, die die Expression früher Gene regulieren. Frühe virale Proteine vermitteln die virale DNA-Replikation.

Dann exprimieren späte virale Gene Strukturproteine, die sich zusammen mit dem viralen Genom zusammensetzen, um Virionpartikel der Nachkommen zu