JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 5:32 Min. • July 8th, 2025
Mit mikrobiellen Krankheitserregern infizierte Wirtszellen durchlaufen die Apoptose - den programmierten Zelltod. Während der Apoptose bauen DNasen die chromosomale DNA in kleine Fragmente ab, was zum Zelltod führt.
Um Apoptose mit dem TUNEL-Assay nachzuweisen, nehmen Sie einen Objektträger mit einem deparaffinisierten und rehydrierten Hautgewebeschnitt, der mit einem Pilzerreger infiziert ist.
Behandeln Sie das Gewebe mit Proteinase-K, um die zellulären DNasen zu inaktivieren und zu verhindern, dass sie die DNA während der Analyse möglicherweise abbauen. Fügen Sie Wasserstoffperoxid hinzu, um die Reaktion zu löschen, und waschen Sie den Objektträger, um nicht umgesetzte Proteinase-K zu entfernen.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, der Digoxigenin-markierte Desoxyuridintriphosphate oder dUTPs enthält. Ergänzen Sie es mit einer terminalen Desoxynukleotidyltransferase, einem TdT-Enzym und inkubieren Sie. In apoptotischen Zellen katalysiert das TdT-Enzym die Bindung von markierten dUTPs an die exponierten 3'-Hydroxylgruppen der fragmentierten DNA.
Fügen Sie als Nächstes einen Anti-Digoxigenin-Antikörper hinzu, der an einen Rhodamin-Reporter konjugiert ist, und inkubieren Sie ihn im Dunkeln
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos