Der Phagozytose-Assay: eine Immunfärbetechnik zur Visualisierung des apoptotischen Zellengulfments in den embryonalen Zellen von Drosophila melanogaster

Makrophagen sind spezialisierte Immunzellen, die die Zellen durch Apoptose - den programmierten Zelltod durch Phagozytose - reinigen.

Um die apoptotische Zellverschlingung zu beurteilen, beginnen Sie mit einem Objektträger mit fixierten embryonalen Drosophila-Zellen, einschließlich apoptotischer Körper, die von Hämozyten - wirbellosen Makrophagen - verschlungen werden.

Behandeln Sie die Zellen zunächst mit einem blockierenden Reagenz, das die unspezifischen Stellen blockiert. Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die an die Croquemort-Rezeptoren binden - phagozytische Marker von Hämozyten. Waschen Sie die überschüssigen Antikörper ab.

Fügen Sie alkalische Phosphatase-markierte Sekundärantikörper hinzu, die an die Primärantikörper binden. Geben Sie nun eine geeignete chromogene Substratlösung auf den Objektträger und inkubieren Sie. Während der Inkubation reagiert die alkalische Phosphatase mit dem chromogenen Substrat und bildet violett gefärbte Granulate in den Hämozyten.

Als nächstes fügen Sie ein Reaktionsgemisch hinzu, das die terminale Desoxynukleotidyltransferase, das TdT-Enzym und Digoxigenin-gebundene Nukleotide umfasst. TdT katalysiert die Bindung von Digoxigenin-gebundenen