Fixierter Zell-Efferozytose-Assay: Eine Methode zur Untersuchung der efferozytären Aufnahme apoptotischer Zellen durch Makrophagen mittels Fluoreszenzmikroskopie

Zellen, die sich in der Apoptose - dem programmierten Zelltod - befinden, zeigen Eat-Me-Signale auf ihrer Zelloberfläche, die den Abbau durch Fresszellen - spezialisierte Immunzellen - erleichtern. Dieser Prozess der Beseitigung apoptotischer Zellen wird als Efferozytose bezeichnet.

Um den Efferozytose-Assay durchzuführen, nehmen Sie zunächst eine Suspension von doppelt gefärbten apoptotischen Zellen. Die Oberflächen dieser Zellen werden mit Biotin markiert, und das Zytoplasma wird mit einem Zellverfolgungsfarbstoff markiert, der apoptotische zellabgeleitete Materialien markiert

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Geben Sie die Zellsuspension in eine Kultur aus anhaftenden Makrophagenzellen, die als Efferozyten fungieren. Zentrifuge, wodurch der Kontakt zwischen Makrophagen und apoptotischen Zellen erzwungen wird, und inkubieren.

Efferozytäre Rezeptoren auf Makrophagen binden an Phosphatidylserin - ein Eat-Me-Signal - auf der apoptotischen Zellmembran und erleichtern deren Verschlingung. Kleine Fragmente der apoptotischen Zelle werden in einem membrangebundenen Vesikel, dem sogenannten Efferosom, aufgenommen.

Daraus ergibt sich eine efferozytierte Fraktion - ein Teil der apoptotischen Zelle innerhalb des Makrophagen