Löslicher Proteinassay zur Quantifizierung des Gehalts an löslichen Proteinen in Pflanzengeweben

Um den Gehalt an löslichen Proteinen in einem Pflanzengewebe in einem Röhrchen zu quantifizieren, beginnen Sie mit einer angemessenen Menge an gemahlenem, lyophilisiertem Pflanzengewebe.

Geben Sie Natriumhydroxid, ein Alkali, in das Rohr und beschallen Sie. Das alkalische Milieu mit den mechanischen Kräften zerrüttet die Zellen und setzt intrazelluläre Inhalte frei, darunter Makromoleküle - lösliche Proteine und Kohlenhydrate. Inkubieren Sie bei höheren Temperaturen.

In Gegenwart von Hitze verursachen Alkalien eine Proteinhydrolyse, die kleinere Peptide bildet und die Löslichkeit des Proteins erhöht. Zusätzlich werden Kohlenhydrate abgebaut.

Zentrifugieren Sie die Mischung. Sammeln Sie den löslichen proteinhaltigen Überstand. Fügen Sie Salzsäure hinzu, um den pH-Wert zu neutralisieren.

Behandeln Sie die Probe mit Trichloressigsäure, TCA. TCA zerstört die Hydrathülle, die die Proteine umgibt, was zu Proteinaggregation und -fällung führt.

Zentrifugieren und den TCA-haltigen Überstand entfernen. Waschen Sie das Proteinpellet mit eiskaltem Aceton, um TCA-Reste zu entfernen, die die Schätzung löslicher Proteine beeinträchtigen könnten.

Trockne das Aceton an der Luft. Resuspendieren Sie