Luciferase-Assay zur Untersuchung der Wirksamkeit von antiparasitären Chemikalien gegen Parasiten

Toxoplasma gondii – ein Protozoen-Parasit – vermehrt sich ausschließlich in kernhaltigen, tierischen Wirtszellen. Es dringt durch den endozytären Prozess in die Wirtszellen ein und bildet eine parasitophore Vakuole. In der Vakuole nimmt der Parasit zytosolische Proteine des Wirts auf und erhält Nährstoffe für das Wachstum.

Um die Wirksamkeit von Antiparasitika auf Parasiten in Wirtszellen zu testen, entnehmen Sie eine Assay-Platte, die eine adhärente Kultur menschlicher Vorhautfibroblasten in mehreren Vertiefungen enthält.

Geben Sie die gleichen Mengen an Toxoplasma-Parasiten, die Luciferase exprimieren – ein Lumineszenz produzierendes Enzym – in jede Vertiefung. Inkubieren Sie, so dass die Parasiten in die Wirtszellen eindringen und in der parasitophoren Vakuole wachsen können.

Nach der Inkubation das Medium aspirieren und die nicht aufgenommenen Parasiten entfernen. Ergänzen Sie die Vertiefungen mit unterschiedlichen Konzentrationen von Cysteinprotease, einer antiparasitären Verbindung, und inkubieren Sie.

Wirkstoffmoleküle dringen in die Wirtszelle ein, um die Parasiten zu erreichen. Sobald sich das Medikament im Inneren befindet, hemmt es das Cystein-Protease-Enzym des Parasite