β-Galactosidase-Assay zur Bewertung der arzneimittelinduzierten Zytotoxizität bei Parasiten

Trypanosoma cruzi, ein obligater intrazellulärer Parasit, dringt als Trypomastigote – ein geißeliges, nicht-proliferatives Entwicklungsstadium – in die Wirtszellen von Säugetieren ein und differenziert sich zu nicht-flagellierten Amastigoten, die sich im Zytoplasma durch binäre Spaltung vermehren.

Nach der Proliferation differenzieren sich Amastigoten wieder zu Trypomastigoten, die die Wirtszellen daran hindern, in den Kreislauf zu gelangen, was zu einer systemischen Infektion führt.

Um das zytotoxische In-vitro-Potenzial eines Testantiparasitikums gegen Trypanosoma cruzi zu bewerten, beginnen Sie mit einer Kultur transgener Trypanosoma cruzi-Parasiten – im gewünschten Entwicklungsstadium – die das Enzym β-Galactosidase stabil exprimieren.

Suspendieren Sie die Parasiten in geeigneten Medien. Auf eine Multi-Well-Platte umfüllen. Fügen Sie geeignete Konzentrationen des Testantiparasitikums hinzu. Ausbrüten.

Das Medikament diffundiert passiv durch die Parasitenmembranen und wird in toxische Zwischenprodukte metabolisiert. Diese Metaboliten gelangen in die Zellkerne und verursachen DNA-Schäden, wodurch die Proteinsynthese, einschließlich der β-Galactosidase, gehemmt wird, was sich nega