Kalzifizierungsassay zur Messung der Kalziumkonzentration in interstitiellen Zellen der Aortenklappe

Aortenklappensegel enthalten eine heterogene Population von interstitiellen Klappenzellen (VICs), die über die extrazellulären Matrixschichten verteilt sind. Nach der Stimulation verwandeln sich VICs in Osteoblasten – Knochenmatrix-bildende Zellen.

Reife Osteoblasten sezernieren Kollagen und Knochenmatrixproteine. Diese Proteine helfen den Osteoblasten, sich an die Matrix zu binden. Schließlich gelangen intrazelluläre Calciumionen in das Matrixmilieu und lagern sich zusammen mit Phosphaten als mineralisierte Knötchen ab, was zu einer Verkalkung der Aortenklappe führt.

Um die Kalziumkonzentration in verkalkten Aortenklappen zu bestimmen, beginnen Sie mit einer Kultur von VICs in einer Sechs-Well-Platte. Entsorgen Sie das Nährmedium, geben Sie ein osteogenes Medium in die Vertiefung und inkubieren Sie.

Während der Inkubation regt Insulin im osteogenen Medium die VICs an, sich in osteogene Phänotypen zu differenzieren. Diese Osteoblasten sezernieren Knochenmatrixproteine und Ascorbinsäure im osteogenen Medium, was sie dazu veranlasst, eine kollagenreiche extrazelluläre Matrix zu bilden.

Schließlich bilden das intrazelluläre Kalzium der Osteoblasten und die Phosphate des Mediums minera