JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:57 Min. • July 8th, 2025
Im Zebrafisch verursacht Feinstaub (PM) – ein Luftschadstoff – eine durch oxidativen Stress verursachte Herzfunktionsstörungen.
Um die Auswirkungen von PM auf den Zebrafisch zu untersuchen, beginnen Sie damit, Zebrafischembryonen PM-abgeleitetem, extrahierbarem organischem Material, EOM, auszusetzen, das die Bildung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) auslöst.
ROS oxidiert die DNA-Base Guanin zu 8-Hydroxy-2'-Desoxyguanosin oder 8-OHdG und bewirkt bei der Phosphorylierung von Histon H2AX die Bildung von γH2AX – einem Marker für DNA-Doppelstrangbrüche.
Nach der Belichtung das Zebrafischherz sezieren und auf einen Objektträger legen. Behandeln Sie das Herz mit einer Fixierlösung, die die Proteine vernetzt und die Zellstruktur stabilisiert.
Fügen Sie als Nächstes ein blockierendes Reagenz hinzu, um unspezifische Bindungsstellen zu verhindern. Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf γH2AX und 8-OHdG in den Herzzellen abzielen.
Fügen Sie als Nächstes zwei verschiedenfarbige fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper hinzu, die spezifisch an die Fc-Region ihres jeweiligen Primärantikörpers binden. Färben Sie die Probe schließlich mit DAPI – einer DNA-spezifischen Färbung –, die an die
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos