Neuronaler Todestest zur Bewertung des Zelltods im ex vivo Epilepsiemodell

Epilepsie – spontane und wiederkehrende Anfälle im Gehirn – führt zum neuronalen Zelltod.

Um den neuronalen Tod in einem Ex-vivo-Epilepsiemodell zu untersuchen, beginnen Sie mit der Entnahme eines organotypischen Schnitts aus rhinalem Kortex und Hippocampus, der aus dem Gehirn eines Rattenwelpen hergestellt wurde, in einem geeigneten Medium.

Der organotypische Schnitt besteht aus der rheinischen Rinde und dem Hippocampus. Bei allmählichem Serumentzug zeigen diese Regionen sich entwickelnde epileptische Ereignisse, die zu einem anfallsinduzierten neuronalen Tod führen.

Geben Sie die erforderliche Menge an Propidiumiodid, PI – einem Fluoreszenzfarbstoff – in die Kultur und inkubieren Sie. Durch die geschädigte Zellmembran dringt PI in die toten Neuronen ein und bindet an die DNA; die lebenden Neuronen mit intakter Membran sind nicht in der Lage, PI aufzunehmen.

Legen Sie die organotypische Scheibe zur Immunfärbung auf einen Objektträger. Fügen Sie eine Permeabilisierungs-blockierende Lösung hinzu und inkubieren Sie.

Detergensmittelmoleküle in der Lösung lösen Membranlipide auf und schaffen Poren in der Membran intakter Zellen – und machen sie durchlässig für nachfolgende Immunfärbesc