JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 6:19 Min. • July 8th, 2025
Die Exposition gegenüber schädlichen Stoffen führt zu einzel- und doppelsträngigen Brüchen in der zellulären DNA, die zu DNA-Schäden führen.
Um DNA-Schäden zu erkennen, beginnen Sie mit einer Einzelzellsuspension chemisch behandelter Zellen in verflüssigter, niedrigschmelzender Agarose. Laden Sie die Suspension auf einen Objektträger und lassen Sie die Agarose erstarren – was die Immobilisierung der Zellen in der porösen Gelmatrix ermöglicht.
Behandeln Sie die Zellen mit Lysepuffer. Die Detergenzien im Puffer lösen die Zell- und Kernmembranen auf, während die Salze die Histone aus der DNA entfernen und einen Nukleoidkörper bilden, der DNA enthält, die an die Kernmatrix gebunden ist.
Inkubieren Sie die Objektträger in einem alkalischen Elektrophoresepuffer. Dies führt dazu, dass sich die DNA abwickelt und einzelsträngige Fragmente entstehen. Legen Sie den Objektträger in ein Elektrophoresegerät und schließen Sie es an die Stromversorgung an. Dies ermöglicht die Migration von negativ geladener DNA zur positiven Anode.
Die unbeschädigte DNA bleibt im Nukleoidkörper eingeschränkt. Im Gegensatz dazu beginnen sich die kleineren, beschädigten DNA-Fragmente in Richtung Anode zu bewegen. Di
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