JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:04 Min. • July 8th, 2025
Aminosäuretransporter sind membrangebundene Proteine, die den Aminosäuretransfer durch Zellmembranen vermitteln und so lebenswichtige zelluläre Prozesse regulieren.
Um die Aminosäureaufnahme in vitro zu untersuchen, nehmen Sie eine Kultur von aus dem Knochenmark der Maus gewonnenen Stromazellen. Aspirieren Sie das Wachstumsmedium. Fügen Sie einen vorgewärmten Puffer hinzu, der mit Glutamin – einer Aminosäure – angereichert ist, die mit radioaktivem Wasserstoff markiert ist. Inkubieren Sie für die erforderliche Dauer.
Der vorgewärmte Puffer liefert die physiologische Temperatur und einen angemessenen pH-Wert, der für die zelluläre Aufnahme von Glutamin erforderlich ist. Glutamintransporter bestehen aus Transportdomänen – die für die Substrattranslokation über den Natriumionen-gekoppelten Co-Transport verantwortlich sind – und membranverankerten Gerüstdomänen.
Die Transportdomäne bindet an radioaktiv markiertes Glutamin zusammen mit Natriumionen aus dem Puffer. Bei der Bindung gibt es die Moleküle an das Zytoplasma ab. Gleichzeitig transloziert die Transportdomäne intrazelluläre Natriumionen und neutrale Aminosäuren außerhalb der Zelle, was zu einer zellulären Homöostase führt.
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