JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:00 Min. • July 8th, 2025
Die Glykogensynthase – ein entscheidendes Enzym bei der Glykogensynthese – spaltet Uridindiphosphat-Glukose oder UDP-Glukose – einen Nukleotidzucker – in UDP- und Glykosylreste und fügt das freigesetzte Glukosemonomer der wachsenden Glykogenkette hinzu.
Um die Glykogensynthase-Aktivität abzuschätzen, beginnen Sie mit der Einnahme eines Reaktionsgemisches, das Glykogen, UDP-Glukose, ATP, Phosphoenolpyruvat und Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid oder NADH enthält, in einem Röhrchen. Fügen Sie das Kinase-Enzym Nukleosiddiphosphat oder NDP sowie einen Cocktail aus Pyruvatkinase und Laktatdehydrogenase hinzu. Mischen Sie den Inhalt und inkubieren Sie.
Geben Sie eine Glykogensynthase-haltige Probe in das Röhrchen, um die enzymatische Reaktion zu initiieren.
Die Glykogensynthase wirkt auf UDP-Glukose und erzeugt UDP und einen Glykosylrest. Das Enzym nimmt das freie Glukosemonomer auf und baut es in die Glykogenkette des Reaktionsgemisches ein. In Gegenwart von ATP phosphoryliert die NDP-Kinase des Reaktionsgemischs das ungenutzte UDP, wandelt es in UTP um und erzeugt ADP.
Das Enzym Pyruvatkinase wirkt auf ADP und fügt ein Phosphat hinzu, das durch das Phosphoenolpyruvat des Reaktionsgemisches
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