Impedanzbasierter zellulärer Assay zur Messung der Vielzahl von Infektionen mit Influenzaviren

Während einer Influenzavirusinfektion dringt das Virus durch Endozytose in die Zelle ein und kapert die Wirtszellmaschinerie, wodurch Nachkommenvirionen produziert werden. Diese werden freigesetzt, infizieren benachbarte Zellen und verursachen eine Kaskade von Infektionen.

Um das Verhältnis von infektiösen Influenzaviren zu Zellen in Kultur – die Vielzahl der Infektionen – zu messen, geben Sie eine geeignete Dichte an frisch gewonnener Säugetierzellsuspension in eine Mikrotiterplatte.

Die Platte enthält impedanzmessende Gold-Mikroelektroden, die in den Bohrlochboden eingelassen sind. Inkubieren, so dass die Zellen am Boden der Vertiefung haften und die exponentielle Wachstumsphase vor der Infektion erreichen können.

Legen Sie ein kleines elektrisches Potential zwischen den Mikroelektroden an. Zellen, die auf die Mikroelektroden geklebt sind, wirken als Isolatoren, die den Stromfluss begrenzen und den elektrischen Widerstand – die Impedanz – erhöhen, die gemessen wird.

Entfernen Sie das Medium. Pipettieren Sie die Suspension des Influenzavirus in die Vertiefungen. Ergänzen Sie mit einer geeigneten Serin-Endoprotease.

Während der Inkubation spaltet und aktiviert die Serin-Endoproteas