JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:35 Min. • July 8th, 2025
Zellen erzeugen bei Stoffwechselprozessen geringe Mengen an freien Radikalen.
Unter pathologischen Zuständen kommt es zu einer Überproduktion freier Radikale, die oxidativen Stress verursacht. Diese freien Radikale greifen mehrfach ungesättigte Fettsäuren in den Phospholipiden der Zellmembran in einem Prozess an, der als Lipidperoxidation bezeichnet wird. Dabei entstehen giftige Oxidationsprodukte, darunter Lipidhydroperoxide und Malondialdehyd (MDA), die Membranschäden und Zelltod verursachen.
Um oxidativen Stress in Humanserum in vitro mit dem Thiobarbitursäure-Reaktivsubstanz-Assay (TBARS) nachzuweisen, beginnen Sie mit einem Röhrchen mit Humanserum, das mit einer oxidationsinduzierenden Verbindung behandelt wurde. Das behandelte Serum besteht hauptsächlich aus Lipidperoxidationsprodukten – MDA und Lipidhydroperoxiden – sowie Phospholipiden, Lipiden und Proteinen.
Als nächstes fügen Sie Natriumdodecylsulfat (SDS) hinzu und mischen Sie, um die Lipide zu lösen und das MDA freizusetzen. SDS denaturiert alle kontaminierenden Proteine. Fügen Sie einen geeigneten sauren Puffer hinzu, gefolgt von saurer Thiobarbitursäure (TBA). Bei hoher Temperatur inkubieren.
Unter sauren Bedingungen
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