Aderhaut-Keimungs-Assay zur Ex-vivo-Untersuchung der okulären mikrovaskulären Proliferation

Im Auge eines Säugetieres enthält die Aderhaut, die sich zwischen Sklera und Netzhaut befindet, perivaskuläre Makrophagen und die Choriokapillaris – eine Schicht von Blutkapillaren, die von Perizyten ausgekleidet sind und die Netzhaut mit Sauerstoff und Nährstoffen versorgen. Abnorme Blutgefäße, die aus der Choriokapillaris sprießen, treten bei mehreren vaskulären Augenerkrankungen auf.

Um dysregulierte Choriokapillaris, die ex vivo sprießen, zu untersuchen, nehmen Sie geerntete Mausaugen-Explantate, die die Aderhaut enthalten, die an die Sklera und das retinale Pigmentepithel (RPE) gebunden ist.

Geben Sie Tröpfchen aus Basalmembranextrakt (BME) – einem Hydrogel, das mit extrazellulären Matrixproteinen angereichert ist – in die Vertiefungen einer Multi-Well-Platte. Legen Sie die Explantate in das Tröpfchen, um eine Abflachung des Gewebes zu vermeiden. Lassen Sie den BME erstarren.

Fügen Sie Medium hinzu, das mit Endothelzellen oder EC-spezifischen Wachstumsfaktoren ergänzt ist. Ausbrüten. Das RPE sezerniert den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor, der neben den EC-spezifischen Wachstumsfaktoren die kapillare EC-Proliferation stimuliert.

Das verfestigte BME bildet eine extrazel